BK-FL正置熒光顯微鏡是以紫外線為光源,用以照射被檢物體,使之發(fā)出熒光,然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。主要用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光。
BK-FL正置熒光顯微鏡觀察到的熒光圖像具有形態(tài)特征,具有熒光顏色和亮度。在判斷結(jié)果時,必須結(jié)合起來作出的判斷。結(jié)果是根據(jù)主觀指標(biāo),即工人的眼睛來記錄的。作為一般的定性觀測,它基本上是的。隨著科技的發(fā)展,客觀指標(biāo)被用來記錄判斷結(jié)果,如使用細胞分光光度計、圖像分析儀等儀器。但是,這些文書所記錄的結(jié)果也必須與主觀判斷相結(jié)合。
BK-FL正置熒光顯微鏡的標(biāo)本制作要求:
1、載玻片:載玻片厚度應(yīng)在0.8~1.2mm之間,太厚的坡片,一方面光吸收多,另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚集。載玻片必須光潔,厚度均勻,無明顯自發(fā)熒光。有時需用石英玻璃載玻片。
2、蓋玻片:蓋玻片厚度在0.17mm左右,光潔。為了加強激發(fā)光,也可用干涉蓋玻片,這是一種特制的表面鍍有若干層對不同波長的光起到不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)的蓋玻片,它可以使熒光順利通過,而反射激發(fā)光,這種反射的激發(fā)光可激發(fā)標(biāo)本。
3、標(biāo)本:組織切片或其他標(biāo)本不能太厚,若太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部,而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外,細胞重疊或雜質(zhì)掩蓋,影響判斷。
4、封裱劑:封裱劑常用甘油,必須無自發(fā)熒光,無色透明,熒光的亮度在pH8.5~9.5時較亮,不易很快褪去。
5、鏡油:一般BK-FL正置熒光顯微鏡和用油鏡觀察標(biāo)本時,必須使用鏡油,最好使用特制的無熒光鏡油,也可用上述甘油代替,液體石蠟也可用,只是折光率較低,對圖像質(zhì)量略有影響。